大鼠糖原磷酸化酶同工酶(GP-II)ELISA試劑盒

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Elisa試劑盒系列：

ELISA試劑盒在國內有許多種叫法，例如：ELISA檢測試劑盒、ELISA Kit、酶聯免疫試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒、酶聯免疫分析試劑盒、酶免試劑盒等，比較常見的叫法是ELISA檢測試劑盒、酶聯免疫吸附測定試劑盒等。

ELISA試劑盒自從60-70年代問世以來，得到科研工作者的認可及推崇，在歐美及中國獲得很大的推廣，尤其是國內生化領域的長足發展。

Elisa生物試驗是一種敏感性高，特異性強，重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存，操作簡便，結果判斷較客觀等因素，已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。

可檢測種屬

（人，小鼠，大鼠，植物，魚，蝦，蟹，牛，羊，狗，貓，微生物，細胞，土壤等動植物）

可以檢測樣為

（血清，血漿，唾液，尿液，組織，細胞上清，裂解液等）

產品檢測目的：

樣本水平表達（定量檢測，定性檢測，酶活性檢測）

規格：96T 可以檢測89個樣  48T可以檢測41個樣

備注：6個標準一個空白對照

有效期：6個月 保存2-8°C

大鼠糖原磷酸化酶同工酶(GP-II)ELISA試劑盒

elisa試劑盒的優點：

一、高效、靈敏、特異的抗體；

二、穩定的重復性和可靠性；

三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體；

四、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型；

五、最大限度的節省實驗經費。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗體固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗體，與待測抗原進行鍵結

d. 洗去多余未鍵結一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結

e. 洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標抗體，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗體，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗體，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結。

c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測的一次抗體鍵結。

d. 洗去多余未鍵結二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產物的含量即可測量待測抗體的含量。

原理：利用酶標記的抗抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗體固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗體

b. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗體數量有限，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結，即所謂競爭法之由來。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。

e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA。

原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液，另一組只加酶標記抗原，經孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的未知抗原的量。

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測效果，需要根據說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲存

2. 在實驗進行前，請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致，再進行后續操作

3. 溶解標準品過程中，注意標準品是否受潮，過程中要避免產生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時，正確使用封板膠紙可保證結果的準確性

6. 正確洗板有助于實驗結果的穩定性

7. TMB顯色底物在上板前應為無色，請避光保存。加入孔板后，將由無色變成不同程度的藍色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致，加入終止液，溶液顏色由藍色變為黃色。如果出現綠色，即表明終止液與底物未混勻，請充分混合

實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

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